【考马斯亮蓝测定蛋白质含量】一、
考马斯亮蓝法（Bradford法）是一种常用的蛋白质定量方法，因其操作简便、灵敏度高、干扰少而被广泛应用于生物化学实验中。该方法基于考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合后颜色变化的原理，通过比色法测定蛋白质浓度。
在实验过程中，蛋白质与染料结合后，溶液的颜色从棕红色变为蓝色，最大吸收波长由465 nm移至595 nm。利用分光光度计测得595 nm处的吸光度值，并与已知浓度的标准蛋白溶液进行比较，从而计算出待测样品中的蛋白质含量。
该方法的优点包括：快速、灵敏、试剂稳定、对大多数蛋白质具有良好的线性关系。但其缺点是部分去垢剂、高浓度盐类及某些氨基酸可能对测定结果产生干扰。
二、关键信息对比表
| 项目 | 内容说明 |
| 方法名称 | 考马斯亮蓝法（Bradford法） |
| 原理 | 蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合后显色，吸光度变化与蛋白质浓度成正比 |
| 最大吸收波长 | 595 nm（结合后） |
| 灵敏度 | 高，可检测低至1 µg/mL的蛋白质 |
| 操作步骤 | 样品与染料混合 → 室温反应 → 分光光度计测595 nm吸光度 → 对比标准曲线计算浓度 |
| 优点 | 快速、简便、灵敏、干扰少 |
| 缺点 | 受去垢剂、高盐、某些氨基酸影响；需制备标准曲线 |
| 常用标准蛋白 | 牛血清白蛋白（BSA） |
| 应用范围 | 生物样本、细胞裂解液、酶制剂等蛋白质含量测定 |
三、注意事项
1. 实验前应确保所有试剂新鲜且未受污染。
2. 不同类型的蛋白质对染料的结合能力不同，建议使用与样品相似的蛋白质作为标准。
3. 避免使用含有强还原剂或高浓度去垢剂的样品。
4. 标准曲线应尽量覆盖样品预期浓度范围，以提高准确性。
通过以上方法和注意事项，可以有效提升考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的准确性和可靠性。
